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​东波教授论文(GLP1R-GFP稳定转染 Rin-m5F 细胞系的构建)

2019-09-20 19:56 来源:中视财经网T|T

  9月6日,首个国家亚健康干预技术成果应用中心落户长沙麓谷,国家中医药管理局亚健康干预技术实验室隶属于国家中医药管理局,是国内唯一从事亚健康干预技术研究的专业机构,拥有以国家973项目主持人、教育部新世纪优秀人才为核心的研究团队,专业从事亚健康干预技术的研究。2012年9月,该实验室主任刘东波教授当选为联合国亚太亚健康干预技术联盟主席,以“未病防病、既病防变、愈后防复”为目标,对慢性非传染性疾病提出心理、行为、膳食和营养干预方案,并于2016年成立了国家中医药管理局亚健康干预技术实验室糖尿病干预中心。糖尿病作为实验室创立后的一个重要的慢性病研究对象,历经长期研究,独创了国内第一套糖尿病中医营养干预技术。

  刘东波教授文献当中分享了国家中医药管理局亚健康干预技术实验室糖尿病干预中心研究成果。他指出,糖尿病中医营养干预技术就是以三低三高(低血糖负荷、低卡路里、低碳水化合物和高不饱和脂肪酸、高膳食纤维、高药食同源)的饮食模式和间歇性禁食方式治疗糖尿病,以科学的方法为导向,重点教会糖尿病病人正确的健康生活方式,教会他们自我管理血糖的方法,逐步实现恢复胰岛功能,重新夺回控制血糖的主动权,帮助广大糖尿病患者控制病情发展的问题,有利于糖尿病患者科学的自我管理,达到改善健康状况或治疗疾病的目标。

  以下是刘东波教授的文献:

  GLP1R-GFP稳定转染 Rin-m5F 细胞系的构建

  胡涌泉 1,2 ,曾璐漫 2,6 ,吴艳阳 2,5 ,魏云林 7 ,刘东波 1,2,3,4*

  (1. 湖南农业大学园艺园林学院,长沙 410128;2. 国家中医药管理局亚健康干预技术实验室,长沙 410128;3. 湖南省作物种质创新与资源利用重点实验室,长沙 410128;4.湖南省植物功能成分利用协同创新中心,长沙410128;5. 湖南农业大学食品科学技术学院,长沙 410128;6. 湖南应用技术学院,湖南 常德415100;7. 昆明理工大学生命科学与技术学院,昆明 650500)摘要:目的 本研究目的是构建一种能稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)人胰高血糖素样肽 -1 受体(GLP1R)的胰岛细胞系,用来筛选 GLP1R 激动剂类药物。方法 使用 X-tremeGENE HP DNATransfection Reagent将 pCMV6-AC-GLP1R-GFP 质粒转染到 Rin-m5F细胞,经 G418 筛选单克隆 Rin-m5F/GLP1R-GFP 细胞并扩大培养。结果 该细胞能稳定传代,荧光显微镜下观察细胞绿色荧光分布均匀,Western blot验证 GLP1R 蛋白表达显著增加。在实验验证中,对照空白组中细胞绿色荧光分布均匀,阴性药物格列本脲(非 GLP1R 靶点药物)作用时细胞内无明显荧光斑点出现,阳性药物百泌达作用(GLP1R 激动剂类药物)时细胞内出现显著荧光斑点。结论 GLP1R 激动剂类药物筛选模型 Rin-m5F/GLP1R-GFP 成功构建。该模型能对混合物样品进行筛选,具有假阳性极低、筛选所需样本小、筛选样品量大、易标准化、筛选速度快、特异性强等优势,为 GLP1R 激动剂类药物的筛选奠定了基础。

  关键词:人胰高血糖素样肽 -1 受体;Rin-m5F;质粒转染

  中图分类号:R739.4    文献标识码:A    文章编号: 1672-2981(2017)06-0785-05doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2017.06.018Construction of GLP1R-GFP stably transfection Rin-m5F cell linesHU Yong-quan 1, 2 , ZENG Lu-man 2, 6 , WU Yan-yang 2, 5 , WEI Yun-lin 7 , LIU Dong-bo 1, 2, 3, 4* (1. Horticulture andLandscape College, Hunan Agricultural University, Changsha 410128; 2.State Key Laboratory of SubhealthIntervention Technology, Changsha410128; 3. Hunan Key Laboratory of Crop Germplasm Innovation andUtilization, Hunan Agricultural University, Changsha 410128; 4. Hunan Co-Innovation Center forUtilizationof Botanical Functional Ingredients, Changsha 410128; 5. College of Food Science and Technology, HunanAgricultural University, Changsha 410128; 6. Hunan College of Applied Technology, Changde Hunan 415100;7. Faculty of Life Sciences and Technology, Kunming University of Science and Technology, Kunming 650500)Abstract: Objective To establish a new method to screen glucagon like peptide-1 receptor (GLP1R) agonists.Methods The pCMV6-AC-GLP1R-GFP plasmid was transfected into Rin-m5F cells byX-tremeGENE HPDNA transfection reagent. Monoclonal Rin-m5F/GLP1R-GFP cells were screened by G418. The fluorescencespots were observed by fluorescence microscope. GLP1R expression was de tected by Western blot. ResultsThese cells were passaged normally with stable green fluorescence, and the expression of GLP1R protein wassignificantly increased. The green fluorescence of the control group was dispersive, and the Glibenclamide

作者:佚名   责任编辑:曹平
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